收到細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)瓶，第一次操作的束手無策，怎么辦？

 首先我們得弄明白我們得細(xì)胞是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞或者是半懸浮細(xì)胞,不明白的同學(xué)可以參考下圖哦：

   半懸浮半貼壁:

BV-2細(xì)胞

貼壁細(xì)胞：HCMEC/D3

   懸浮細(xì)胞：

THP-1

 

貼壁細(xì)胞請遵守以下準(zhǔn)則：

細(xì)胞收到后，顯微鏡下觀察，有些細(xì)胞貼壁比較牢，它不會因為運輸問題有變化，收到后下顯微鏡下觀察細(xì)胞的密度，確定無污染，細(xì)胞無異常先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2個小時后，按照貼壁細(xì)胞消化順序消化：

一

貼壁細(xì)胞消化順序如下：

1.準(zhǔn)備工作，胰酶、培養(yǎng)基、PBS各預(yù)熱10-15分鐘
1. 去上清，先用PBS清洗兩次

2.棄PBS后，加入1ml胰酶，前后左右輕輕搖勻后，超凈臺常溫放置3-5分鐘左右

3.顯微鏡下觀察細(xì)胞，若細(xì)胞變得橢圓透亮后，輕拍細(xì)胞瓶壁

4.顯微鏡下觀察細(xì)胞是否已經(jīng)脫落，要是沒有脫落繼續(xù)消化2分鐘后再輕輕拍打，95%以上細(xì)胞脫落請立即加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化

5.將消化下來的細(xì)胞懸液移入離心管離心，正常離心轉(zhuǎn)速：1000-1200轉(zhuǎn)，5分鐘

6.分瓶，第一次傳代建議1：2傳，或者傳代一瓶，凍存一支

二

懸浮細(xì)胞傳代規(guī)則：

1，收到細(xì)胞后穩(wěn)定一小時后，分兩個50ml的離心管對等離心1000轉(zhuǎn)5分鐘

2.棄上清，一管分2個T25瓶傳代，一管凍存

懸浮細(xì)胞傳代不需要每次都離心操作，建議每傳代2次離心操作一次，以去除細(xì)胞中的碎片

三

半懸浮半貼壁細(xì)胞消化要領(lǐng)：

1.收到細(xì)胞穩(wěn)定一小時后，懸浮細(xì)胞收集離心，貼壁細(xì)胞按照貼壁順序來消化即可

溫馨提示：

收到細(xì)胞請一定要仔細(xì)閱讀說明書，按照傳代步驟操作，請保持和商家一樣的培養(yǎng)方式，比如說，牛是吃草的，你想改善它的營養(yǎng)，也只能把草的質(zhì)量提高，千萬不能換成肉啊 ，不只貴還會把牛餓死。

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